1     壓液相色譜法

1.1   范圍

    本標準規定了用壓液相色譜法測定飲用水及其水源水中草甘膦和氨甲基膦酸。

本法適用于生活飲用水及其水源水中草甘膦和氨甲基膦酸的測定。

本法草甘膦和氨甲基膦酸的zui低檢測質量均為5.0ng。若取200uL直接進樣則zui低檢測質量濃度均為25μg/L。

目前未見有基質干擾的報道。草甘膦可在氯消毒過的水中降解。草甘膦在礦物和玻璃表面有吸附作用。

1.2    原理

采用陰離子或陽離子交換色譜法分離草甘膦和氨甲基膦酸，經過柱后衍生，用熒光檢測器檢測。柱后衍生反應為用此氯酸鹽溶液將草甘膦氧化成氨基乙酸；然后氨基乙酸與鄰苯二醛（OPA）和2-巰基乙醇（MERC）的混合液反應，形成一種光的異吲哚產物。氨甲基膦酸可直接與OPA/MERC混合液反應，在次氯酸鹽存在下，檢測靈敏度會下降。

1.3    材料與試劑

1.3.1  水：用純水系統生產的水或HPLC水。

1.3.2  磷酸（ρ20 =1.69g/mL）：R304

1.3.6  磷酸二氫鉀：R311

1.3.7  乙二胺四乙酸二鈉溶液：將0.37g的乙二胺四乙酸二鈉（Na2-EDTA• 2H2O）加入1L純水中配置溶度為0.001mol/L的溶液，并經0.22μm或0.45μm的濾膜過濾。

1.3.8  氯化鈉：R313

1.3.10  次氯酸鈣：R303

1.3.11  氧化試劑：見試劑盒（P/N：R300-01）操作手冊

1.3.12  鄰苯二醛（OPA）：R301

1.3.13  2-巰基乙醇（MERC）：R302

1.3.14  硼砂：R312

1.3.16  熒光標記溶液：見試劑盒（P/N：R300-01）操作手冊

1.3.17  草甘膦：純度≥99%。

1.3.18  甲基膦酸：純度≥99%。

1.4    儀器設備

1.4.1  壓液相色譜儀：附熒光檢測器。

1.4.2  色譜柱：A72545， Comatex SAX， 250X4.6mm,5um

1.4.3  柱后反應器：CoM6000PCR雙衍生系統

1.5    樣品

1.5.1  樣品的性質

1.5.1.1  樣品的名稱：水樣。

1.5.1.2  樣品采集后應用聚丙烯容器儲存，加入100mg/L的硫代硫酸鈉可消除氯帶來的影響。樣品應儲存在4℃、避光的環境中，并在2周內測定。

1.5.2  樣品預處理

1.5.2.1樣品濃度≥25μg/L時，不需濃縮，取9.9mL的樣品和0.1mL 0.1mol/L的EDTA，經0.22μm或0.45μm的濾膜過濾，進樣200μL。

1.5.2.2  樣品濃度低于檢出*需要對樣品進行濃縮，取500mL水樣，若為懸浮液，將樣品通過粗濾膜過濾，取250mL移至500mL圓底瓶中，加5mL鹽酸（18.1.3.4）于燒瓶中，5mL鹽酸（18.1.3.4）于剩余樣品中。在旋轉蒸發器中濃縮，緩慢升溫從20℃到60℃。在*部分*蒸發前，加入剩余樣品和2次5mL清洗液，蒸干，若必要，用干氮去除zui后的痕量水。取2.9mL流動相（若必要調節PH=2）和0.1mL0.03mol/L的EDTA溶解殘留。過0.45μm濾膜，進樣。

1.6    分析步驟

1.6.1  儀器的調整

1.6.1.1  流動相: 見試劑盒（P/N：R300-01）操作手冊

1.6.1.2  柱溫：50℃。

1.6.1.3  流速：1.0mL/min。

1.6.1.4  熒光檢測器：激光波長Ex=230nm（氘）、340nm（石英鹵素或氙），發射波長Em=420nm~455nm。

1.6.1.5  柱后反應條件

1.6.1.5.1  氧化劑流速：0.5mL/min。

1.6.1.5.2  OPA-MERC溶液：流速0.5mL/min。

1.6.2  校準

1.6.2.1  定量分析中的標準方法：外標法。

1.6.2.2  標準樣品

1.6.2.2.1  草甘膦和氨甲基磷酸標準溶液：用水配置草甘膦、氨甲基膦酸均為0.1mg/mL儲備溶液。稀釋儲備液配置溶度為10μg/mL、1.0μg/mL系列工作液。儲存于聚丙烯瓶中，冰箱保存。每月重配置。

1.6.2.2.2  草甘膦和氨甲基磷酸HPLC校準溶液：用0.001mol/L EDTA二鈉溶液配置草甘膦、氨甲基磷酸溶度為0.11mg/mL 儲備液。稀釋儲備液配置0、0.025、0.05、0.10、0.50、1.00μg/mL標準系列工作液。儲存于聚丙烯瓶中，冰箱保存。每月重配置。

1.6.2.2.3  標準數據的表示：用標準曲線計算測定結果。

1.7  定量分析 

取200μL水樣注入色譜儀，測量峰或峰面積。通過標準曲線的回歸分析計算草甘膦和氨甲基磷酸的濃度。濃縮樣品可通過濃縮因子（500mL原始樣品/3mL），確定原始水樣濃度。

1.8  度和度

對樣品（加標濃度0.5μg/L~5000μg/L）重復測定六次，草甘膦的相對標準偏差為12%~20%，平均標準偏差為15%。氨甲基膦酸的相對標準偏差為6.6%~29%，平均標準偏差為14.5%.草甘膦的加標回收率為94.6%~120%，平均回收率104%。氨甲基膦酸的回收率為86.0%~100%，平均回收率為93.1%。